Lähes kaikki myyneet yritykset ovatbromelain-entsyymijauheon sekoitettu papaiiniin. Bromelaiinia on vaikea puhdistaa tasolle 5000GDU/g. mutta papaiini on erittäin helppo puhdistaa tasolle 1000,000 GDU/g. jopa 2000 000 GDU/g. mutta bromelainin toiminnot eroavat papaiinista. väri, maku, vesiliukoisuus ja maku eroavat väärennetyn tuotteen ja todellisen tuotteen kanssa. Ne eroavat toisistaan oikea bromelain-entsyymijauhe on harmaa, hajuton, mauton ja veteen liukenematon.
Mutta väärällä bromelainilla on seuraavat ominaisuudet:
● Se on vaaleankeltainen, aromaattinen ja miedon makea ja vesiliukoinen. Se on papaiinin ominaisuus.
● Sitä käytetään vähentämään tulehdusta ja lievittämään kipua. mutta papaiinissa ei juuri ole näitä toimintoja.
● Sitä käytetään vain ravintolisänä, ei elintarvikelisäaineena, mutta se voi todellakin olla lääkelaatua. Mutta papaiinia käytetään vain lihan pehmennysjauheena ja kosmetiikkana.
Testasimme bromelainia SDS-PAGE-geelin ja GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL- ja HPLC-menetelmien mukaisesti, väärennetyn tuotteen SDS-PAGE-geelimenetelmässä kohdemolekyylejä on vähemmän.
Seuraavat ovat SDS-sivun elektroforeesitulokset
Yllä olevan pilkku osoittaa, että vain oikealla tuotteella on sama pilkku oikeassa paikassa kuvassa, mutta väärennetyssä tuotteessa on vähän pilkkuja, eli molekyylipaino on tuskin näkyvissä.
Bromelainin molekyylipaino on noin 33 000, mutta papaiinin molekyylipaino on 21 000. Ja HPLC-kromatogrammi:
Huomaat, että vain oikea uute sisältää oikeat molekyylipainot bromelainia ja on havaittavissa HPLC:llä.
Mutta jos testasimme vain Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU) -menetelmällä, katso liite II. Sekä oikealla että väärällä tuotteella on samat tulokset kuin alla:
Ananasvarsi on erittäin halpa, ja nopeus varresta bromelainiin on erittäin alhainen, valmistusprosessissa on jonkin verran saastumista.
Lähes kaikki bromelain-entsyymijauhetehdas ovat lähellä kenttää. He käyttävät tuoretta vartta. Varren lähettäminen pitkän matkan päässä on mahdotonta. Raaka-aine tulee käsitellä mahdollisimman pian, kun se on kerätty pellolta, tai se tulee varastoida alhaisessa lämpötilassa (4-8 astetta) proteiinien hajoamisen välttämiseksi. Todellisessa elämässä valmistaja ei itse asiassa voi täyttää yhtäkään kahdesta yllä olevista ehdoista, koska ananasta on liikaa. Kohtuullinen menetelmä on tasapaino käsittelyajan ja proteiiniaktiivisuuden häviämisen välillä. Yleensä raaka-aineiden valmistus ananassatokaudella ja raaka-aineiden varastointi alhaisessa lämpötilassa (4-8 astetta).
Suoritamme testin SDS-sivun elektroforeesista. Teoriassa voimme nostaa sen arvoon 10,000 tai 20,000.mutta se tulee olemaan erittäin kallista. 5000GDU/g ja tee siitä stabiili ehkä malto-tuen / mikrokapseloidun tai jotain plus orgaaninen uutto/puhdistus.
Liite I
● Menetelmä 5 SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE)
SDS-PAGE on denaturoitu polyakryyliamidigeelielektroforeesimenetelmä. Proteiinien erotteluperiaate tässä menetelmässä perustuu siihen tosiasiaan, että useimmat proteiinit voivat yhdistyä anionisen pinta-aktiivisen aineen natriumdodekyylisulfaatin (SDS) kanssa painosuhteessa muodostaen kompleksin.
Proteiinimolekyylien kantama negatiivinen varaus ylittää reilusti luonnollisten proteiinimolekyylien nettovarauksen eliminoiden eri proteiinimolekyylien varausvaikutuksen ja erottaen proteiinit niiden molekyylikoon mukaan.
Tätä menetelmää käytetään kvalitatiiviseen tunnistamiseen, puhtauden ja epäpuhtauksien valvontaan sekä proteiinien kvantitatiiviseen määritykseen.
1 Instrumenttilaite
Vakiojännite- tai vakiovirtavirtalähde, pystysuora levyelektroforeesisäiliö ja liimanvalmistusmuotti.
2. Reagenssit
(1) Vesi.
(2) Erotusgeelipuskuri (4x, liuos A) 1,5 mol/l trihydroksimetyyliaminometaani kloorivetyhappopuskuri. Punnitaan 18,15 g trihydroksimetyyliaminometaania ja liuotetaan se sopivaan määrään vettä. Säädä pH-arvo 88:aan suolahapolla ja laimenna 100 ml:ksi vedellä.
(3) Punnitaan 58.0g akryyliamidia ja 20 g N,N'-metyleenibisakryyliamidia 30-prosenttisessa akryyliamidiliuoksessa (B-liuos), liuotetaan lämpimään veteen ja laimennetaan 200 ml:ksi, suodatetaan suodatinpaperilla (säilytetään tumma).
(4) Punnitaan 10 g natriumdodekyylisulfaattia 10-prosenttisessa SDS-liuoksessa (C-liuos), liuotetaan veteen ja laimennetaan 100 ml:ksi
(5) Tetrametyylietyleenidiamiiniliuoksen kaupallistamisreagenssi (TEMED, D-liuos).
10-prosenttinen ammoniumpersulfaattiliuos (E-liuos) Punnitaan 10 g ammoniumpersulfaattia, liuotetaan veteen ja laimennetaan 100 ml:ksi. On suositeltavaa valmistaa se ennen käyttöä tai säilyttää erikseen -20 asteessa 2 viikkoa.
(7) Väkevä kumipuskuri (4 ×, F-liuos) 0,5 mol/l Trihydroksimetyyliaminometaani Kloorivetyhappopuskuri, punnita 6,05 g trihydroksimetyyliaminometaania, lisää sopiva määrä vettä liukenemaan, säädä pH-arvo 6,8:aan suolavedellä. happoa ja laimenna vedellä 100 ml:ksi.
(8) Elektrodipuskuri (10 ×) Punnitaan 30 g trimetyyliaminometaania, 144 g glysiiniä ja 10 g natriumdodekyylisulfaattia, liuotetaan ne veteen ja laimennetaan noin 800 ml:ksi. Säädä pH-arvoksi 8.1-8.8 suolahapolla ja laimenna vedellä 1000 ml:aan.
(9) Pelkistymätön näytepuskuri (4 ×) Punnitaan 303 g trimetyyliaminometaania, 20 mg bromifenolisinistä ja 8,0 g natriumdodekyylisulfaattia, mitataan 40 ml glyserolia, liuotetaan veteen ja laimennetaan noin 80 ml:ksi. Säädä pH 68:aan suolahapolla ja laimenna 100 ml:ksi vedellä.
(8) Elektrodipuskuri (10 ×) Punnitaan 30 g trimetyyliaminometaania, 144 g glysiiniä ja 10 g natriumdodekyylisulfaattia, liuotetaan veteen ja laimennetaan noin 800 ml:ksi. Säädä DH-arvoksi 81-88 suolahapolla ja laimenna 1000 ml:ksi vedellä
(9) Pelkistämätön näytepuskuri (4 ×) Punnitaan 3,03 g trimetyyliaminometaania, 20 mg bromifenolisinistä ja 80 g natriumdodekyylisulfaattia, mitataan 40 ml glyserolia, liuotetaan veteen ja laimennetaan noin 80 ml:ksi. Säädä pH 6,8:aan suolahapolla ja laimenna 100 ml:ksi vedellä.
(10) Vähennetty testiainepuskuri (4 ×) Punnitaan 3,03 g trimetyyliaminometaania, 20 mg bromifenolisinistä ja 80 g natriumdodekyylisulfaattia, mitataan 40 ml glyserolia, liuotetaan ja laimennetaan vedellä noin 80 ml:ksi ja lisätään - 20ml merkaptoetanolia, säädä pH 6,8:aan kloorivetyhapolla, laimenna vedellä 100 ml:ksi (tai 3,03 g trimetyyliaminometaania, 20 mg bromifenolisinistä, 8,0 g natriumdodekyylisulfaattia, mittaa 40 ml glyserolia, laimenna veteen ja laimenna 80 ml:aan, säädä pH arvoon 6,8 kloorivetyhapolla, laimenna vedellä 100 ml:ksi ja lisää ditiotreitolia 100 mmol/l:ksi ennen käyttöä.
● Liite II
Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU)
A. Tarkoitus: Tätä menetelmää käytetään bromelain-entsyymijauheen proteolyyttisen aktiivisuuden määrittämiseen.
B. Varustus:
1. pH-mittari
2. Vakiolämpöinen vesihaude 45.0 astetta ± 0,1 astetta
3. Analyyttinen tasapaino
4. Mittapullot
5. Volumetriset pipetit
6. Ajastin
7. Digitaalinen byretti (tarkkuus 0,1 ml)
8. Liesituuletin
9. Automaattiset pipetit
C. Turvallisuusohjeet:
Tämä testi on suoritettava vetokaapissa.
1. Käytä normaaleja laboratorion turvallisuuskäytäntöjä.
2. Formaldehydi: Valmistele ja säilytä vetokaapissa koko ajan. Tunnettu karsinogeeninen ja teratogeeninen.
3. Peroksidi: Vahva hapetin
D. Reagenssit ja reagenssivalmisteet:
1. Tislattu vesi: noin 500 ml: säädä pH arvoon 4,5 0,1 N HCl:lla.
2. Gelatiinialusta:
a. Liuota 25 grammaa gelatiinia (Mikrobiologie. 1.04070) 375 ml:aan kuumaa vettä, kiehauta. Jäähdytä 45 asteeseen.
b. Säädä pH arvoon 4,5 0,1 N HCl:lla ja laimenna 500 ml:aan pH 4,5 tislattua vettä.
c. Pidä gelatiinialusta 45 asteessa.
3. Puskuriliuos:
a. Lisää 15 g NaCl hitaasti 40-50 ml:aan vettä 150 ml:n dekantterilasissa ja sekoita liukenemaan.
b. Lisää 0,570 ml etikkahappoa.
c. Säädä pH arvoon 4,5 0,2 N HCl:lla (tilavuus on suurempi kuin 100 ml.)
4. 3 prosenttia vetyperoksidia:
a. Pipetoi 2,5 ml 30-prosenttista vetyperoksidia (varastoliuos) 25 ml:n mittapulloon ja laimenna tilavuuteen tislatulla vedellä pH 4,5
5. 37 prosenttia formaldehydiä pH 9.0: a. Säädä riittävä määrä (100 ml) formaldehydiä pH-arvoon 9,0 0,1 N NaOH:lla (noin 20 ml formaldehydiä näytettä kohti ennen pH:n säätöä).
Gelatin Digestion Unit Analytical Method (GDU) - jatk.
6. 0.100 N NaOH: (Ostettu standardoituna) a. Kantaliuos: standardoitu 0,100 N:iin
E. Menettely:
1. Entsyymin valmistus:
a. Entsyymivalmisteen laskeminen
Paino {{0}}/tavoiteaktiivisuus (noin 0,05 g tai 50 mg)
A. Punnitaan entsyymi tarkasti 50 ml:n mittapulloon
B. Lisää 8,3 ml puskuriliuosta.
b. Anna seistä 30 minuuttia huoneenlämmössä.
C. Laimenna 50 ml:ksi tislatulla vedellä pH 4,5, lisää pieni sekoitustanko ja sekoita vielä 10-15 minuuttia.
2. Entsyymimenettely:
a. Pipetoi 25 ml gelatiinialustaa kuhunkin kahteen 100 ml:n dekantterilasiin, jotka sisältävät sekoitustankoja, ja aseta ne vesihauteeseen 45 asteeseen 5 minuutiksi, toinen testiliuosta ja toinen tyhjää liuosta varten.
b. Testiratkaisu:
1) Lisää 1.0 ml bromelainentsyymijauheliuosta testiliuokselle tarkoitettuun dekantterilasiin, aloita ajoitus ja pyöritä.
2) Kun on inkuboitu täsmälleen 20 minuuttia 45 asteessa, lisää 0,1 ml 3-prosenttista vetyperoksidia ja pyöritä.
3) Inkuboi vielä 5 minuuttia.
4) Poista dekantterilasi vesihauteesta ja aseta pH-anturi sisään jatkuvasti sekoittaen.
5) Kirjaa pH 10 sekunnin kuluttua (alkuperäinen pH)
6) Säädä pH arvoon 6.0 0,1 N NaOH:lla. (Noin 2-4 ml)
*Huomaa: Kun säädät pH:ta arvoon 6.{1}} ole varovainen pH:ssa 5,8; pH nousee hitaasti ja pienet NaOH:n lisäykset tässä vaiheessa nostavat pH:ta merkittävästi.
7) Jatka jatkuvasti sekoittamista, lisää 10 ml 37-prosenttista formaldehydiä pH 9,0.
8) Kirjaa pH 10 sekunnin ja 1 minuutin kuluttua.
9) Titraa pH-arvoon 9.0 0,1 N NaOH:lla.
10) Kirjaa titraustilavuus muistiin.
Tämä on testitiitteri, T. c.
Tyhjä ratkaisu: Tyhjä liuos tulee suorittaa samanaikaisesti testiliuoksen kanssa. Tämä saadaan aikaan aloittamalla tyhjän liuoksen määritys 12 minuuttia testiliuoksen aloittamisen jälkeen. Tämä antaa sinulle aikaa suorittaa testiliuoksen määritys ennen kuin sinun on siirryttävä tyhjään liuokseen. 1) Lisää 0,1 ml 3-prosenttista vetyperoksidia nollaliuokselle tarkoitettuun dekantterilasiin ja pyöritä.
2) Kun on inkuboitu täsmälleen 20 minuuttia 45 asteessa, lisää 1,0 ml bromelainliuosta ja pyöritä.
3) Inkuboi vielä 5 minuuttia.
GELATIININ DIGESTIOYKSIKÖN ANALYYSIMENETELMÄ (GDU) - jatk.
4) Poista dekantterilasi vesihauteesta ja aseta pH-anturi sisään jatkuvasti sekoittaen.
5) Kirjaa pH 10 sekunnin kuluttua (alkuperäinen pH)
6) Säädä pH arvoon 6.0 0,1 N NaOH:lla. (Noin 2-4 ml)*Katso yllä oleva huomautus.
7) Jatka jatkuvasti sekoittamista, lisää 10 ml 37-prosenttista formaldehydiä pH 9,0.
8) Kirjaa pH 10 sekunnin ja 1 minuutin kuluttua.
9) Titraa pH-arvoon 9.0 0,1 N NaOH:lla.
10) Kirjaa titraustilavuus muistiin. Tämä on tyhjä tiitteri, B.
F. Laskenta:
1. Määritelmä: Yksi gelatiinihajotusyksikkö on se määrä entsyymiä, joka vapauttaa 20 minuutin pilkkomisen jälkeen 45 asteessa 1 mg aminotyppeä standardigelatiiniliuoksesta pH:ssa 4,5 tai pH 5,5 (GDU pH 4,5 tai pH 5,5).
GDU/g {0}} (TB) x 14 x N x 50 paino (g) Missä: T=Testitiitteri (ml 0,1 N NaOH) B=Tyhjä tiitteri (ml 0,1 N NaOH) N=Standardoidun NaOH:n normaaliarvo (eli 0,100) Paino (g)=Entsyymin alkupaino
G. Testausparametrit:
1. Entsyymivalmisteet laimennetaan pitoisuuteen noin 0,001 g/ml (1 mg/ml) tai bromelain-entsyymijauhetiivisteelle noin 1-2 GDU/ml. Vertailumateriaali analysoidaan jokaisen ajon yhteydessä menetelmän tarkkuuden varmistamiseksi.
Guanjie toimittaa irtotavarana bromelainjauhetta GDU-testimenetelmällä. Tuotantoprosessimme toimii CGMP-standardin työpajoissa, joissa käytetään kolmea tuotantolinjaa kahdessa tehtaassa ja kahta riippumatonta laboratoriota. Jos sinulla on kysyttävää tuotteistamme, ota meihin yhteyttä osoitteessainfo@gybiotech.com.
